艾滋病病毒（HIV）潜伏感染的存在一直是实现治愈的重大障碍。尽管抗逆转录病毒疗法（ART）可有效抑制病毒复制，显著降低患者的发病率和死亡率，但病毒潜伏于静息的CD4+ T细胞中，形成难以清除的病毒库，仍可在治疗停止后迅速复发。针对这一难题，科学界发展出多种潜伏逆转策略，希望通过激活沉默的病毒转录而使潜伏感染细胞暴露出来，促进其被免疫系统或病毒本身诱导的细胞毒性机制清除。近年来，mRNA及脂质纳米颗粒（LNP）技术的崛起为研发更为精准、高效、低毒性的潜伏逆转剂（LRAs）提供了新思路。传统小分子LRAs虽可诱导病毒RNA表达，但多存在潜伏激活特异性差、免疫功能抑制及脱落率低的缺陷，因此迫切需要新型、靶向性强的基因治疗方法。针对难以转染、耐受性强的静息CD4+ T细胞，科学家团队研发出一种新型脂质纳米颗粒配方，简称LNP X。
该配方结合了SM-102这一已被用于高效COVID-19疫苗的阳离子脂质和天然植物甾醇ß-谷甾醇，显著增强了纳米颗粒与T细胞的相互作用及胞内mRNA翻译效率，令mRNA传递效率在静息状态CD4+ T细胞中达到惊人的75%以上，同时保持极低的细胞毒性与免疫激活反应。通过包 encapsulating mRNA编码HIV关键转录激活蛋白Tat，LNP X成功将mRNA递送至静息CD4+ T细胞，实现病毒转录的强烈激活。Tat蛋白可结合HIV长末端重复序列（LTR）上的转激活响应元件（TAR），促进RNA聚合酶Ⅱ的转录延伸，从而激活沉默的病毒基因表达。与以往需要配合非特异性小分子辅助激活的Tat mRNA递送技术相比，LNP X独特的配方使单独使用Tat mRNA也能显著逆转病毒潜伏，从人体外周血CD4+ T细胞样本中看到明显的病毒RNA转录及病毒释放增加。值得关注的是，Tat-LNP X在激活病毒的同时，并未引发T细胞表面活化标志物如CD25或CD69等的表达增加，避免了传统激活剂介导的全身免疫激活及相关毒副反应，为临床安全性提供有力支持。除Tat mRNA外，LNP X平台亦兼容更复杂的mRNA表达体系，如CRISPR激活系统（CRISPRa）。
该系统利用失活的Cas9蛋白融合多重转录激活域，通过导向RNA精准定位至HIV LTR启动子区域，实现特异性的病毒基因激活。LNP X成功将dCas9-VP64 mRNA、MS2-p65-HSF1激活因子mRNA及导向RNA共封装并传递，首次在未经预刺激的T细胞中实现CRISPRa介导的内源基因如CD25表达显著上调。针对HIV的LTR区域设计的多个gRNA也在体外激活了潜伏病毒转录，显示出这一系统作为下一代高选择性LRA的巨大潜力。尽管CRISPRa-LNP X的激活效力尚不及Tat mRNA，但其特异性强且无明显免疫激活效应，预示着优化组合剂量和递送技术后，未来有望在安全与疗效间取得优良平衡。对于LNP X的作用机制，研究团队通过细胞内定位及蛋白质表达定量分析发现，其优越功效不仅归因于纳米颗粒表面结合与细胞摄取的提升，更重要的是mRNA在胞质内的转译效率显著增强。这一发现挑战了先前关于ß-谷甾醇主要提升内体逃逸效率的观点，表明LNP X通过改善mRNA包裹体结构及释放动力学，促进了蛋白质产物的高效表达。
作为首个能够无须细胞激活即可高效转染静息CD4+ T细胞的脂质纳米颗粒配方，LNP X技术开拓了T细胞治疗领域的新边界，有望取代电穿孔或病毒载体等技术，实现临床转化中的安全与便利。虽然Tat-LNP X成功激活了HIV转录及病毒释放，但经单次体外处理后，并未观察到潜伏病毒库中完整病毒DNA的明显减少，这反映出潜伏细胞对病毒介导的细胞死亡存在一定程度的抵抗能力。未来治疗策略或需将LNP X介导的潜伏逆转与促凋亡药物或免疫效应增强剂协同应用，全面提高潜伏病毒库的清除率。同时，单细胞层面的研究将有助于揭示LNP X对不同静息T细胞亚群中潜伏病毒活化的均一性及深度。展望未来，LNP X的广泛应用不仅限于HIV潜伏激活，还可衍生出多种基因调控及免疫治疗手段。例如递送CRISPR-Cas9系统实现病毒基因组的切除，或利用基因编辑介导CCR5共受体敲除，阻断病毒入侵。
此外，优化LNP X的体内分布和细胞靶向性，结合特定配体修饰，有望实现更加精准的T细胞基因治疗，降低全身毒性。药代动力学、安全性和免疫原性仍需深入评估，确保未来临床应用的可行性和安全性。综上所述，LNP X代表了mRNA递送技术在逆转HIV潜伏感染领域里的重要突破。其高效、靶细胞特异性强及低毒性的优势，为设计新一代HIV潜伏逆转剂与基因疗法提供了坚实基础，开辟了精准干预潜伏病毒库的新纪元。随着技术不断完善与临床前研究推进，这项创新有望为全球艾滋病治愈事业带来历史性进展，提升患者生活质量，实现ART停药后长期病毒控制乃至彻底根治的梦想。
