人类免疫缺陷病毒（HIV）感染虽然已有抗逆转录病毒治疗（ART）有效控制，但病毒潜伏在休眠的CD4+T细胞中仍构成根治难题。潜伏期病毒能保持在转录沉默状态，逃避免疫系统识别及药物干扰，随着T细胞激活又重新活跃，导致病毒复发。为实现艾滋病的根治，科学家们亟需开发策略绕开病毒潜伏状态，激活病毒转录同时减少潜藏病毒库的规模。近期，基于信使RNA（mRNA）与脂质纳米颗粒（LNP）技术的新兴研究展示出巨大潜力，特别是在非激活状态的休眠T细胞中实现高效递送，为HIV潜伏逆转提供新思路。传统的滞留HIV潜伏库的治疗难点出在休眠CD4+T细胞极其难以转染，且现有的小分子潜伏逆转剂（LRA）激活效率低且副作用明显。为了克服这一限制，研究者设计了一种新型LNP配方，称为LNP X，采用SM-102离子化脂质替代既有DLin-MC3-DMA，并用β-谷甾醇代替胆固醇，这一组合显著提高了mRNA向休眠T细胞的递送效率，并且在不激活细胞的情况下避免了毒性。
研究在实验中使用报告基因mCherry和mScarlet mRNA对比传统的patisiran类似配方，显示LNP X能够在未激活的初级CD4+T细胞中实现高达百分之七十以上的转染效率，而传统LNP仅有约百分之二，且伴随较低毒性。更重要的是，这种优异的表现并非由于内体逃逸效率显著提升，而是LNP X增强了与细胞的结合和递送效率，且递送至细胞质中的mRNA翻译效率也有显著提升，为后续疗法设计带来了宝贵的启示。随后，研究团队将编码HIV Tat蛋白的mRNA封装进LNP X。Tat蛋白作为HIV转录的关键激活因子，能促进转录的延伸和剪接。利用包含Tat蛋白mRNA的LNP X，在携带休眠HIV的CD4+T细胞中观察到了极为显著的病毒转录激活，远远超过传统的T细胞活化剂PMA/离子霉素。这种激活优势体现在全面提升转录起始、延伸和剪接阶段相关的RNA水平。
且在无T细胞广泛激活的条件下实现了潜伏病毒的甦醒，避免了全身免疫激活的弊端，显示出极好的治疗前景。更进一步，研究探索将CRISPR激活系统（CRISPRa）mRNA组分一同封装至LNP X，靶向HIV长末端重复序列（LTR）启动子区域，以实现更为病毒特异性的转录激活。此系统包含死Cas9融合的转录激活域和导向RNA（gRNA），可以精确地激活整合在基因组中的HIV潜伏病毒。实验结果表明，CRISPRa-LNP X有效提升了多种HIV RNA转录产物的表达，且不存在广谱细胞毒性或T细胞激活现象。然而，CRISPRa激活的潜伏病毒转录效率相较Tat mRNA稍逊一筹。总的来说，LNP X作为一种创新性的mRNA载体，能够无须前期T细胞激活即实现高效递送且伴随低毒性，为针对难转染细胞的基因治疗策略奠定基础。
通过传递编码Tat蛋白的mRNA成功重启潜伏HIV，可以克服传统LRA仅作用于转录起始的限制，打开病毒转录完整延续和剪接路径，从而诱导潜伏病毒暴露于宿主免疫系统。结合高特异性的CRISPR激活系统，未来有望实现更安全精准的病毒激活与清除策略。研究中所设计的脂质配方及递送方案也为其他涉及难以转染的免疫细胞疾病治疗提供了技术借鉴。虽然当前研究尚停留在体外和外周血细胞水平，还需进一步验证递送效率、疗效持久性及针对潜伏病毒清除的协同方案，但该平台具备巨大的临床转化潜力。未来需要结合免疫增强策略或靶向毒性调控，以促进激活病毒细胞的清除并减少病毒复发风险。同时，深入分析LNP X的体内分布、免疫原性及优化剂量，是推动其走向临床应用的关键步骤。
总之，LNP X推动的mRNA疗法开拓了HIV根治研究的新方向，尤其是在挑战极大的休眠CD4+T细胞人群中提供了前所未有的转基因治疗契机。随着纳米技术、RNA设计和基因编辑技术的不断进步，基于高效递送的定制mRNA分子有望在未来实现对HIV潜伏库的精准打击，助力全球抗击艾滋病的目标。
